Identification of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and indicator microorganisms in commercialized raw meats and fresh sausages from Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brazil / Identificação de Salmonella spp., Listeria monocytogenes e micro-organismos indicadores em carnes cruas e embutidos frescais comercializados na cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: This study evaluated the sanitary hygienic quality and the presence of pathogenic microorganisms in raw meats and fresh sausages marketed in the city of Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brazil. We analyzed 238 samples of fresh sausages, beef, pork, and chicken from 18 commercial establishments (butchers, supermarkets, and groceries). Samples were subjected to enumerate hygiene indicator microorganisms (mesophilic aerobes and enterobacteria) and detection of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. The mean counts of mesophilic aerobes and enterobacteria were 5.09 and 3.54 log CFU/g, respectively. Beef samples presented the highest frequency of Salmonella spp. (7.93%) and fresh sausages present the highest frequency of L. monocytogenes (19.04%). Among the analyzed samples, 43.70% did not comply with the microbiological parameters established by the Brazilian Ministry of Health. The presence of Salmonella spp. and L. monocytogenes in different samples and commercial establishments demonstrate the failures of good manufacturing practices in industrial environmental and retails points and the need to train food handlers to reduce the exposure of consumers to potential risks.

RESUMO: Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade higiênica sanitária e a presença de microrganismos patogênicos em carnes in natura e linguiças frescais comercializadas na cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Foram analisadas 238 amostras de linguiças, carne bovina, suína e de frango de 18 estabelecimentos comerciais (açougues, supermercados e mercearias). As amostras foram submetidas à enumeração de microrganismos indicadores de higiene (aeróbios mesófilos e enterobactérias) e detecção de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. As contagens médias de aeróbios mesófilos e enterobactérias foram 5,09 e 3,54 log UFC/g, respectivamente. Salmonella spp. esteve presente mais frequentemente em amostras de carne bovina (4,91 %), enquanto L. monocytogenes foi mais frequente em linguiças frescais (19,04 %). Das amostras analisadas, 43,70 % não atenderam aos parâmetros microbiológicos estabelecidos pelo Ministério da Saúde. A presença de Salmonella spp. e L. monocytogenes em diferentes amostras e estabelecimentos comerciais demonstra falhas de boas práticas de fabricação na indústria e pontos de venda, além da necessidade de treinar manipuladores de alimentos para reduzir a exposição dos consumidores à riscos.

Equine infectious anemia in the western region of Rio Grande do Sul, Brazil / Anemia infecciosa equina na região oeste do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: This study aimed to characterize the outbreaks of equine infectious anemia (EIA) identified, between the years 2009 and 2015, in the western region of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. We identified 26 positive horses on 24 properties. Each positive property was considered an outbreak of the disease. The diagnoses were made using the agar gel immunodiffusion (AGID) test as a part of the sanitary checks conducted during animal transportation or certification of the horse´s sanitary status. The positive properties included farms or horse barns, and the infected animals were used for ranch work, sports, or reproduction. One outbreak was identified in animals that were being illegally transported from Argentina to Brazil. Fifteen outbreaks occurred on properties that were not registered with the Official Veterinary Service (OVS). Eleven outbreaks were identified in urban areas and 13 in rural areas. Twelve of the 24 outbreaks were diagnosed in 2015 alone, nine of which occurred in São Borja county. On two properties, a diagnosis could not be confirmed with a retest; therefore, these outbreaks were discharged. During sanitation checks on three properties, 12 additional positive animals were identified among a population of 1,108 susceptible animals. Based on these findings, we concluded that a subclinical form of the infection is present in that area, which is linked to properties that are not registered with the OVS, and that animals which are transported illegally across international borders represent a potential risk.

RESUMO: O objetivo do estudo foi caracterizar os focos de EIA identificados, entre 2009 e 2015, na região oeste do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Inicialmente foram identificados 26 equinos positivos em 24 propriedades, sendo que cada propriedade foi considerada um foco. Os diagnósticos foram realizados por imunodifusão em gel de ágar (AGID) na ocasião do transporte ou como medidas sanitárias, em casos de vínculo com animais infectados ou para fim de certificação do status sanitário. Um foco foi identificado em animais transportados ilegalmente da Argentina para o Brasil. Os estabelecimentos positivos eram fazendas ou estábulos e os animais infectados utilizados para trabalho, esporte ou reprodução. Quinze focos ocorreram em propriedades não cadastradas no SVO. Onze focos localizaram-se na zona urbana e 13 em propriedades rurais. Somente no ano de 2015 foram diagnosticados 12 dos 24 focos, sendo que no munícipio de São Borja ocorreram nove surtos neste período. Em duas propriedades o resultado inicial não foi confirmado no reteste, fazendo com que estes focos fossem encerrados imediatamente. Em três propriedades, durante o saneamento, identificou-se outros 12 animais positivos em três propriedades, de uma população de 1.108 susceptíveis. Assim sendo, pode-se concluir que a infecção que está presente na região, ocorre de maneira subclínica, associada a propriedades não cadastradas no SVO e animais transportados de forma ilegal, inclusive transporte internacional ilegal.

Hydatidosis, cysticercosis, and tuberculosis rates in bovine slaughtered under state sanitary inspection in Rio Grande do Sul, Brazil / Ocorrência de hidatidose, cisticercose e tuberculose em bovinos abatidos sob inspeção estadual no Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT This study sought to evaluate the occurrence of lesions suggestive of hydatidosis, cysticercosis, and tuberculosis in animals slaughtered under sanitary inspection of the Divisão de Inspeção de Produtos de Origem Animal (DIPOA), in the state of Rio Grande do Sul. Condemnation data between the years 2009 and 2017 were obtained from Secretaria da Agricultura Pecuária e Irrigação (SEAPI) and presented according to the administrative regions established by SEAPI. In that period, 7,509,544 cattle were slaughtered and condemnations occurred in all regions of the state at varying levels. The mean condemnation values showed the presence of hydatidosis in 523,399 (6.97%), cysticercosis in 92,277 (1.23%), and tuberculosis in 10,595 (0.14%) cattle carcasses. The mean values of hydatidosis diagnoses were higher in the regions of Alegrete (14.19%), Bagé (19.62%), and Pelotas (17.71%). The regions of Osório (1.86%), Santa Maria (2.10%), and São Luiz Gonzaga (1.83%) had highest rates of cysticercosis condemnations. All regions maintained an average bovine tuberculosis diagnosis rate of less than 1% and Estrela region had the highest index (0.70%). Results showed that the three diseases occurred in all regions of the state, the average prevalence rates in each region are variable, and distribution seems to be regionalized. This knowledge contributes to the plans for controlling these diseases, which are zoonoses that cause economic losses to the productive sector.

RESUMO O objetivo do estudo foi avaliar a ocorrência de lesões sugestivas de hidatidose, cisticercose e tuberculose em carcaças bovinas oriundas de abatedouros frigoríficos sob inspeção sanitária da Divisão de Inspeção de Produtos de Origem Animal (DIPOA), no Estado do Rio Grande do Sul. Os dados de condenações entre os anos de 2009 e 2016 foram obtidos junto a Secretaria da Agricultura Pecuária e Irrigação (SEAPI) e apresentados conforme as regiões administrativas estabelecidas pela SEAPI. Nesse período foram abatidos 7.509.544 bovinos e as condenações estiveram presentes em todas as regiões do estado, em níveis variáveis. Os valores médios das condenações demonstraram a presença de hidatidose em 523.399 (6,97%), cisticercose em 92.277 (1,23%) e tuberculose em 10.595 (0,14%) das carcaças bovinas. Os valores médios de condenações por hidatidose foram maiores nas regionais de Alegrete (14,19%), Bagé (19,62%) e Pelotas (17,71%). As regionais de Osório (1,86%), Santa Maria (2,10%) e São Luiz Gonzaga (1,83%) apresentaram as maiores médias para a presença de cisticercose. Todas as regiões mantiveram uma média abaixo de 1% para condenações por tuberculose bovina e a região de Estrela obteve o maior índice (0,70%). Os resultados demonstram que as três enfermidades são causas de condenações em todas as regiões do estado, os índices médios de prevalência em cada região são variáveis e a distribuição parece ser regionalizada. Esse conhecimento poderá subsidiar a elaboração de planos de controle dessas enfermidades, as quais, além do aspecto zoonótico, são responsáveis por perdas econômicas ao setor produtivo pelas condenações de carcaças e órgãos dos bovinos.

Clinical and virological characteristics of calves experimentally infected with a Brazilian isolate of bovine viral diarrhea virus type 1a / Aspectos clínicos e virológicos da infecção experimental de bezerros com uma amostra brasileira do vírus da diarreia viral bovina 1a

ABSTRACT: To study the pathogenicity of the Brazilian bovine viral diarrhea virus (BVDV) type 1a 241.10 isolate, four calves were intranasally inoculated with a viral suspension containing 107.2 TCID50 mL-1. One calf was left uninoculated and kept in contact with the other calves to investigate viral transmissibility. After inoculation, the animals were monitored daily for clinical signs of infection. The presence of the virus in the blood and nasal secretions was confirmed by virus isolation in cell culture. White blood cells were quantified prior to and every 3 days after infection, and the presence of antibodies was checked every 7 days, starting at day 0 until day 42 post-inoculation (pi). After infection, nasal and ocular serous secretions were observed between days 1 and 5 pi, along with a mild cough from days 2 to 4 pi; however, no severe clinical signs were present. Body temperature was slightly elevated between days 4 and 6 pi. The control calf did not develop any of the signs observed in the infected animals. Cell culture-mediated virus isolation confirmed viremia between days 4 and 8 pi and the presence of the virus in the nasal secretions between days 1 and 10 pi. All infected animals showed a decrease in white blood cell count. Antibodies could be detected from day 14 pi, and these levels remained high until day 35 pi. The control calf had no viremia, viral presence in nasal secretions, or positive serology, indicating the absence of viral transmission. Thus, isolate BVDV 1a 241.10 has low pathogenicity and transmissibility but retains immunosuppressive capacity.

RESUMO: Com o objetivo de estudar a patogenicidade de uma amostra brasileira do BVDV-1a (241.10), quatro bovinos foram inoculados pela via intranasal com uma suspensão viral contendo 107,2 TCID50 mL-1. Um bezerro foi mantido em contato com o grupo infectado para avaliar a transmissibilidade. Após a inoculação, os animais foram monitorados diariamente para observação dos sinais clínicos. A presença de vírus no sangue e na secreção nasal foi confirmada pelo isolamento viral em cultivo celular. A contagem total de leucócitos no sangue foi realizada com intervalos de três dias pré- e pós-infecção e a detecção de anticorpos a cada sete dias, iniciando-se no dia 0 até o dia 42 pós-inoculação (pi). Após a inoculação, não foram observados sinais clínicos evidentes, apenas secreção nasal e ocular serosa entre os dias 1 e 5 pi e tosse discreta entre os dias 2 e 4 pi. A temperatura corporal teve leve aumento entre os dias 4 e 6 pi. O animal controle não desenvolveu os sinais observados no grupo infectado. O isolamento viral indicou presença de viremia entre os dias 4 a 8 pi e excreção viral na secreção nasal entre os dias 1 e 10 pi. Os animais inoculados apresentaram redução na contagem total de leucócitos no sangue. A detecção de anticorpos iniciou-se no dia 14 pi e os níveis mantiveram-se elevados até o dia 35 pi. No animal controle, não foi observada viremia, presença de vírus na secreção nasal e sorologia positiva, demonstrando ausência da transmissão. Assim sendo, conclui-se que a amostra de BVDV 1a 241.10 possui baixa patogenicidade, mantém a capacidade imunossupressora e tem baixa transmissibilidade.

Mapping the sites of latency and reactivation by bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) and a thymidine kinase-deleted BoHV-5 in lambs / Mapeamento dos sítios de latência e reativação pelo herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) e por mutante deletado no gene da timidina quinase em ovinos

A thymidine kinase (tk)-deleted bovine herpesvirus 5 (BoHV-5tkΔ) was previously shown to establish latent infection and reactivate - even poorly - in a sheep model (Cadore et al. 2013). As TK-negative alphaherpesviruses are unlike to reactivate in neural tissue, this study investigated the sites of latency and reactivation by this recombinant in lambs. For this, groups of lambs were inoculated intranasally with the parental BoHV-5 strain (SV-507/99) or with the recombinant BoHV-5tkΔ. During latent infection (40 days post-inoculation, pi), the distribution of recombinant virus DNA in neural and non-neural tissues was similar to that of the parental virus. Parental and recombinant virus DNA was consistently detected by PCR in trigeminal ganglia (TGs); frequently in palatine and pharyngeal tonsils and, less frequently in the retropharyngeal lymph nodes. In addition, latent DNA of both viruses was detected in several areas of the brain. After dexamethasone (Dx) administration (day 40pi), the recombinant virus was barely detected in nasal secretions contrasting with marked shedding of the parental virus. In tissues of lambs euthanized at day 3 post-Dx treatment (pDx), reverse-transcription-PCR (RT-PCR) for a late viral mRNA (glycoprotein D gene) demonstrated reactivation of parental virus in neural (TGs) and lymphoid tissues (tonsils, lymph node). In contrast, recombinant virus mRNA was detected only in lymphoid tissues. These results demonstrate that BoHV-5 and the recombinant BoHV-5tkΔ do establish latent infection in neural and non-neural sites. Reactivation of the recombinant BoHV-5tkΔ, however, appeared to occur only in non-neural sites. In anyway, the ability of a tk-deleted strain to reactivate latent infection deserves attention in the context of vaccine safety.

Um recombinante do herpesvírus bovino tipo 5 com deleção no gene da timidina quinase (BoHV-5tkΔ) foi capaz de estabelecer latência e reativar - embora ineficientemente - em modelo experimental em ovinos (Cadore et al. 2013). Como a reativação de alfaherpesvírus defectivos na TK em tecido neural é improvável, o presente estudo investigou os sítios de latência e reativação por esse recombinante em ovinos. Para isso, grupos de ovinos foram inoculados com a cepa de BoHV-5 parental (SV-507/99) ou com o recombinante BoHV-5tkΔ. Durante a infecção latente (dia 40 pós-infecção, pi) a distribuição do DNA do vírus recombinante no encéfalo de ovinos infectados experimentalmente foi similar ao do vírus parental (SV-507/99). O DNA de ambos os vírus foi detectado consistentemente por PCR nos gânglios trigêmeos (TGs), frequentemente nas tonsilas faríngeas e palatinas e, com menos frequência, nos linfonodos retrofaríngeos. Após administração de dexametasona (Dx), o vírus recombinante foi raramente detectado nas secreções nasais, contrastando com excreção abundante do vírus parental. RT-PCR para mRNA de um gene tardio (glicoproteína D) realizado em tecidos de animais eutanasiados 3 dias pós-Dx demonstrou reativação do vírus parental em tecido neural (TGs) e não-neural (tonsilas, linfonodo). Em contraste, a reativação do vírus recombinante ficou restrita ao tecido linfoide. Esses resultados demonstram que tanto o BoHV-5 parental quanto o recombinante estabelecem latência em sítios neurais e não-neurais. No entanto, o recombinante BoHV-5tkΔ parece reativar apenas nos tecidos não-neurais (linfoide). De qualquer forma, a capacidade do recombinante reativar a infecção latente deve ser considerada no contexto de segurança vacinal.

Mapping the sites of latency and reactivation by bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) and a thymidine kinase-deleted BoHV-5 in lambs / Mapeamento dos sítios de latência e reativação pelo herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) e por mutante deletado no gene da timidina quinase em ovinos

A thymidine kinase (tk)-deleted bovine herpesvirus 5 (BoHV-5tkΔ) was previously shown to establish latent infection and reactivate - even poorly - in a sheep model (Cadore et al. 2013). As TK-negative alphaherpesviruses are unlike to reactivate in neural tissue, this study investigated the sites of latency and reactivation by this recombinant in lambs. For this, groups of lambs were inoculated intranasally with the parental BoHV-5 strain (SV-507/99) or with the recombinant BoHV-5tkΔ. During latent infection (40 days post-inoculation, pi), the distribution of recombinant virus DNA in neural and non-neural tissues was similar to that of the parental virus. Parental and recombinant virus DNA was consistently detected by PCR in trigeminal ganglia (TGs); frequently in palatine and pharyngeal tonsils and, less frequently in the retropharyngeal lymph nodes. In addition, latent DNA of both viruses was detected in several areas of the brain. After dexamethasone (Dx) administration (day 40pi), the recombinant virus was barely detected in nasal secretions contrasting with marked shedding of the parental virus. In tissues of lambs euthanized at day 3 post-Dx treatment (pDx), reverse-transcription-PCR (RT-PCR) for a late viral mRNA (glycoprotein D gene) demonstrated reactivation of parental virus in neural (TGs) and lymphoid tissues (tonsils, lymph node). In contrast, recombinant virus mRNA was detected only in lymphoid tissues. These results demonstrate that BoHV-5 and the recombinant BoHV-5tkΔ do establish latent infection in neural and non-neural sites. Reactivation of the recombinant BoHV-5tkΔ, however, appeared to occur only in non-neural sites. In anyway, the ability of a tk-deleted strain to reactivate latent infection deserves attention in the context of vaccine safety.

Um recombinante do herpesvírus bovino tipo 5 com deleção no gene da timidina quinase (BoHV-5tkΔ) foi capaz de estabelecer latência e reativar - embora ineficientemente - em modelo experimental em ovinos (Cadore et al. 2013). Como a reativação de alfaherpesvírus defectivos na TK em tecido neural é improvável, o presente estudo investigou os sítios de latência e reativação por esse recombinante em ovinos. Para isso, grupos de ovinos foram inoculados com a cepa de BoHV-5 parental (SV-507/99) ou com o recombinante BoHV-5tkΔ. Durante a infecção latente (dia 40 pós-infecção, pi) a distribuição do DNA do vírus recombinante no encéfalo de ovinos infectados experimentalmente foi similar ao do vírus parental (SV-507/99). O DNA de ambos os vírus foi detectado consistentemente por PCR nos gânglios trigêmeos (TGs), frequentemente nas tonsilas faríngeas e palatinas e, com menos frequência, nos linfonodos retrofaríngeos. Após administração de dexametasona (Dx), o vírus recombinante foi raramente detectado nas secreções nasais, contrastando com excreção abundante do vírus parental. RT-PCR para mRNA de um gene tardio (glicoproteína D) realizado em tecidos de animais eutanasiados 3 dias pós-Dx demonstrou reativação do vírus parental em tecido neural (TGs) e não-neural (tonsilas, linfonodo). Em contraste, a reativação do vírus recombinante ficou restrita ao tecido linfoide. Esses resultados demonstram que tanto o BoHV-5 parental quanto o recombinante estabelecem latência em sítios neurais e não-neurais. No entanto, o recombinante BoHV-5tkΔ parece reativar apenas nos tecidos não-neurais (linfoide). De qualquer forma, a capacidade do recombinante reativar a infecção latente deve ser considerada no contexto de segurança vacinal.

Isolation and identification of feline calicivirus and feline herpesvirus in Southern Brazil

Feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1) are the two primary causes of upper respiratory tract disease in cats. The aim of this study was to demonstrate the distribution of FCV and FHV-1 among the feline population of several counties in Rio Grande do Sul State, Brazil. To this end, conjunctival and nasal swabs were collected from 302 cats from different locations, including households, breeding catteries, veterinary clinics, animal hospitals and experimental research facilities. The samples were collected between July 2006 to June 2009. The virus isolation was performed in CRFK cells and, subsequently, the identification was confirmed by PCR. FCV, FHV-1, or both were isolated from 55 cats from 28 different locations. FCV alone was isolated from 52.7% (29/55) of the animals that tested positively, FHV-1 alone was isolated from 38.2% (21/55) of the animals that tested positively, and co-infection were detected in 9.1% (5/55) of the animals that tested positively. Virus detection was more prevalent in cats that were less than 1 year old, among animals that shared a living space with other cats, and females. FCV and FHV-1 were isolated from vaccinated cats. In addition, both viruses were isolated from cats that showed no signs of disease. The results suggest that a carrier state is common for both viruses in the evaluated population. A search for other causes of respiratory disease in that population is necessary; and further studies relating to the molecular characterization of viruses and vaccine efficacy are also necessary.

Stable expression and potential use of West Nile virus envelope glycoproteins preM/E as antigen in diagnostic tests

West Nile virus (WNV) envelope glycoproteins preM/E were stably expressed in baby hamster kidney cells and tested as antigen in a fluorescent antibody assay for WNV antibodies. Sera from horses, mice and chicken immunized with an inactivated WNV vaccine and, less consistently, sera from horses acutely infected with WNV, reacted specifically with viral antigens present in preM/E-expressing cells.

Sarcoide equino associado ao papilomavírus bovino BR-UEL-4 / Equine sarcoid associated with bovine papillomavirus BR-UEL-4

Um equino, sem raça definida, macho com três anos de idade apresentou múltiplos nódulos na pele, em diversas regiões do corpo. As lesões localizavam-se predominantemente nos lábios, nas bochechas, na região submandibular e na região inguinal direita. Os tumores caracterizavam-se como sarcoides dos tipos misto, fibroblástico, verrucoso e oculto. Histologicamente apresentaram proliferação de fibroblastos dérmicos, muitas vezes ulcerado, com ou sem hiperplasia pseudoepiteliomatosa da epiderme e formação de pequenos grupos isolados de fibroblastos neoplásicos na derme superficial. Três amostras de tecido foram submetidas à extração de DNA e amplificação por PCR com oligonucleotídeos iniciadores genéricos direcionados para uma região interna do gene L1 dos papilomavírus. Os produtos resultantes da amplificação de duas amostras foram sequenciados e demonstraram identidade de 99 por cento com o papilomavírus bovino (BPV) BR-UEL-4. Essa é a primeira descrição da infecção de equinos, bem como de sua associação com sarcoide pelo BPV BR-UEL-4, um suposto novo tipo de BPV identificado recentemente no Brasil a partir de papilomas cutâneos em bovinos.

A 3-year-old, mixed breed, male horse showed multiple nodules in different areas of the skin. Lesions occurred predominantly on the lips, cheeks, and submandibular and right inguinal regions. The nodules were characterized as mixed, fibroblastic, verrucous and occult types of sarcoid. Histologically there was proliferation of dermal fibroblasts, with or without pseudoepitheliomatous hyperplasia of the epidermis (frequently ulcerated), and formation of small isolated groups of neoplastic fibroblasts in the superficial dermis. Three tissue samples were submitted to DNA extraction and PCR amplification with generic primers for the internal region of the papillomavirus L1 gene. The amplified products from two samples were sequenced and showed 99 percent identity with the bovine papillomavirus (BPV) BR-UEL-4. This is the first description of BPV BR-UEL-4 infecting a horse and causing sarcoid in this species. BPV BR-UEL-4 is a putative new BPV type recently identified in skin papillomas in a Brazilian cattle herd.

Teste imunoenzimático com base em anticorpo monoclonal para a detecção de anticorpos contra os herpesvírus bovino tipos 1 e 5 / A monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine herpesvirus types 1 and 5

Os herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são agentes virais genética e antigenicamente relacionados, associados com diversas manifestações clínicas em bovinos, incluindo doença respiratória, genital, neurológica e abortos. Estudos epidemiológicos indicam que esses vírus estão amplamente disseminados no rebanho bovino brasileiro. O diagnóstico sorológico, que permite identificar animais portadores da infecção latente, se constitui em importante ferramenta para monitoramento individual e de rebanho. O presente artigo relata a padronização de um teste imunoenzimático do tipo ELISA, com base em anticorpo monoclonal (AcM), para a detecção de anticorpos séricos que reagem contra BoHV-1 e/ou BoHV-5. Inicialmente, determinou-se o AcM mais adequado para a sensibilização das placas, as diluições apropriadas do antígeno e dos soros-teste e o ponto de corte do ensaio. Após a padronização, o ensaio foi validado testando-se 506 amostras de soro bovino, previamente testadas para anticorpos neutralizantes contra BoHV-1 e/ou BoHV-5 pela técnica de soroneutralização (SN). Comparando-se com os resultados da SN frente a BoHV-1, o teste de ELISA apresentou sensibilidade e especificidade de 96,6 por cento e 98,3 por cento, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram de 97,6 por cento, a concordância foi de 97,6 por cento e o índice de correlação kappa entre os testes foi de 0,95, o que indica uma excelente concordância. Comparando-se com os resultados da SN frente o BoHV-5, o ELISA apresentou 94,3 por cento de sensibilidade; 97,9 por cento de especificidade; 97,1 por cento de valor preditivo positivo e 95,9 por cento de valor preditivo negativo. Para BoHV-5, a concordância entre os testes foi de 96,4 por cento e o índice de correlação foi de 0,92, também excelente. Esses resultados demonstram que o teste padronizado apresenta sensibilidade e especificidade adequados para o diagnóstico sorológico das infecções por BoHV-1 e BoHV-5...

Bovine herpesviruses 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are antigenic and genetically related viruses associated with different clinical syndromes in cattle, including respiratory, reproductive, neurological disease and abortion. Epidemiological studies indicate the widespread distribution of both viruses among Brazilian cattle. Serological diagnosis, that allows the identification of latently infected animals, represents an important tool for individual and herd monitoring. The present article describes the standardization of a monoclonal antibody (MAb)-based immunoenzymatic test (ELISA) for detection of antibodies to BoHV-1 and/or BoHV-5. The initial steps involved the determination of the most suitable MAb, the appropriate dilutions of viral antigen and serum samples, and the cut-off value of the assay. After standardization, the ELISA was validated by testing 506 cattle serum samples previously tested for neutralizing antibodies to BoHV-1 and BoHV-5 by virus neutralizing assay (VN). Comparing to the VN for BoHV-1 antibodies, the ELISA presented sensitivity and specificity of 96.6 percent and 98.3 percent, respectively. Positive and negative predictive values were 97.6 percent, the concordance between the tests was 97.6 percent and the coefficient of correlation k (kappa) was 0.95, demonstrating an excellent correlation. Comparing to the VN for BoHV-5 antibodies, the ELISA presented 94.3 percent of sensitivity, 97.9 percent of specificity, 97.1 percent of positive predictive value, 95.9 percent negative predictive value, concordance of 96.4 percent and kappa coefficient of 0.92. These results demonstrate that the ELISA presents suitable specificity and sensitivity to be used for individual and herd serological diagnosis of BoHV-1 and BoHV-5, thus, representing an alternative for VN assays and imported ELISA kits.

Selection and characterization of brivudin resistant bovine herpesvirus type 5

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is the agent of meningoencephalitis, an important disease of cattle in South America. The neuropathogenesis of BoHV-5 infection is poorly understood and most previous research focused on the role of envelope glicoproteins in neurovirulence. Thymidine kinase (TK) is a viral enzyme necessary for virus replication in neurons and, therefore, represents a potential target for virus attenuation. The selection and characterization of BoHV-5 variants resistant to the nucleoside analog brivudin (BVDU), which selects TK-defective viruses is here described. Several BVDU-resistant clones were obtained after multiple passages in tissue culture in the presence of BVDU and one clone (BoHV-5/R-27) was further characterized. The selected clone replicated to similar titers and produced plaques with similar size and morphology to those of wild-type virus (SV507/99). The genetic stability of the resistant virus was demonstrated after ten passages in cell culture in the absence of the drug. Moreover, the drug-resistant virus showed reduced virulence in a rabbit model: virus inoculation in four rabbits did not result in disease, in contrast with 75 percent morbidity (3/4) and 50 percent mortality (2/2) among rabbits inoculated with the parental virus. These results demonstrate that BoHV-5 is sensitive to BVDU and that drug-resistant mutants can be readily selected upon BVDU treatment. BVDU-resistant mutants, likely defective in TK, retained their ability to replicate in tissue culture yet were attenuated for rabbits. This strategy to obtain TK-defective BoHV-5 may be useful to study the role of TK in BoHV-5 neuropathogenesis and for vaccine development.

Viroses respiratórias emergentes: os vírus e seu diagnóstico / Viroses respiratory emergent: the viruses and its diagnosis

A emergência e re-emergência de vírus patogênicos são assuntos atuais e de grande interesse para profissionais da área da saúde. As alterações do meio ambiente causada pelo progresso humano, tem possibilitado a introdução de novos agentes virais e o reaparecimento de novas amostras de vírus já conhecido entre os humanos. Por outro lado, o avanço tecnológico tem contribuído para o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico e tratamento cada vez mais rápidas, precisas e eficientes. O vírus da Influenza,agente etiológico da gripe, é um velho conhecido que periodicamente adquire nova roupagem e traz consigo o risco de uma pandemia. O metapneumovírus humano (hMPV) é um vírus recentemente identificado que parece ter papel importante na produção de doenças respiratórias em crianças. Esta revisão aborda aspectos gerais e importantes destes vírus, que podem ser considerados exemplos de agentes re-emergentes e emergentes para a população humana. Serão apresentadas características do agente etiológico, epidemiologia e formas de diagnóstico

Enfermidade gastroentérica e respiratória em bezerros inoculados com amostras brasileiras do vírus da Diarréia Viral Bovina tipo 2 (BVDV-2) / Gastroenteric and respiratory disease in calves inoculated with brazilian isolates of Bovine Viral Diarrhea virus type 2 (BVDV - 2)

Duas amostras brasileiras do vírus da Diarréia Viral Bovina tipo 2 (BVDV-2) foram inoculadas em bezerros com o objetivo de avaliar a sua virulência e estudar a patogenia da infecçäo. Previamente à inoculaçäo, os animais foram imunodeprimidos com dexametasona. Quatro bezerros com idades entre 45 e 90 dias (grupo A) foram inoculados com a amostra SV-260 (n=2) ou LV-96 (n=2) e quatro bezerros com 6 a 8 meses de idade foram inoculados com a amostra SV-260 (grupo B). Após a inoculaçäo, os bezerros do grupo A apresentaram anorexia, depressäo, hipertermia, sinais de infecçäo respiratória e diarréia profusa, acompanhada de melena em dois animais. Os sinais respiratórios e digestivos progrediram, e os animais morreram ou foram sacrificados in extremis entre os dias 7 e 12 pós-inoculaçäo. Ulceras e erosöes no trato digestivo (língua, n=4; esôfago, n=1; rúmen, n=1 e abomasso, n=3), edema pulmonar (n=4) e na mucosa do abomasso (n=3); equimoses e sufusöes na serosa do baço (n=2), no rúmen, no intestino delgado e no ceco (n=1), no coraçäo (n=1) e na mucosa da bexiga (n=1) e intussuscepçäo intestinal (=1) foram os achados macroscópicos mais marcantes. Ulceras e erosöes, acompanhadas de infiltrado mononuclear na mucosa e submucosa do trato digestivo e depleçäo linfóide nos linfonodos e placas de Peyer, foram as alteraçöes microscópicas mais freqüentes. O vírus foi detectado em vários tecidos e órgäos. Antígenos virais foram demonstrados por imuno-histoquímica, principalmente em células epiteliais do trato digestivo; em células mononucleares nos espaços perivasculares e peribronquiais; na cápsula e septos de linfonodos; e em linfócitos e células mononucleares das placas de Peye e baço. Os animais do grupo B apresentaram depressäo, hipertermia, sinais moderados de infecçäo respiratória e digestiva, ulceraçöes na língua e bochecha, mas recuperaram-se após alguns dias. Esses resultados demonstram que as amostras de BVDV-2 foram capazes de reproduzir a enfermidade aguda quando inoculadas em bezerros e que as conseqüências clínico-patológicas da infecçäo foram mais severas nos animais mais jovens.